J Biotechnologie. 31. Dezember 2012;162(2-3):283-8. doi: 10.1016/j.jbiotec.2012.09.008. Epub 20. September 2012.
Herstellung, Strukturanalyse und Bioaktivität des Ribonuklease-A-Albumin-Konjugats: Tetrakonjugation oder PEG als Linker
Zusammenfassung
Ribonuklease A (RNase A) ist ein therapeutisches Enzym mit zytotoxischer Wirkung gegen Tumorzellen. Seine klinische Anwendung wird durch die kurze Halbwertszeit und die unzureichende Stabilität eingeschränkt. Die Konjugation von Albumin kann diese Einschränkung überwinden und gleichzeitig die enzymatische Aktivität von RNase A drastisch verringern. Hier wurden drei Strategien zur Herstellung der RNase A-Rinderserumalbumin (BSA)-Konjugate vorgeschlagen. R-SMCC-B (ein Konjugat aus vier RNase A, verbunden mit einem BSA) und R-PEG-B (ein Monokonjugat) wurden unter Verwendung von Sulfo-SMCC (einem kurzen bifunktionellen Linker) und mal-PEG-NHS (einem bifunktionellen Linker) hergestellt PEG). Mal-PEG-NHS und Hexadecylamin (HDA) wurden zur Herstellung des Monokonjugats R-HDA-B verwendet, wobei HDA zur Bindung von BSA eingesetzt wurde. Der PEG-Linker kann die Nähe zwischen RNase A und BSA verlängern. Im Gegensatz dazu waren in R-SMCC-B vier RNase A eng auf BSA lokalisiert. R-SMCC-B zeigte den niedrigsten K(m) und die höchste relative enzymatische Aktivität und k(cat)/K(m) in den drei Konjugaten. Vermutlich kann die tetravalente Wechselwirkung von RNase A in R-SMCC-B die Bindungsaffinität zu seinem Substrat erhöhen. Darüber hinaus kann die langsame Freisetzung von BSA aus R-HDA-B die enzymatische Aktivität von R-HDA-B erhöhen. Unsere Studie soll Strategien zur Entwicklung von Protein-Albumin-Konjugaten mit hohem therapeutischem Potenzial liefern.
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