PEGylierung von Cytochrom c auf der Ebene von Lysinresten, vermittelt durch eine mikrobielle Transglutaminase
Jian Qin Zhou 1, Ting He 1, Jian Wen Wang 2
Zusammenfassung
Ziele: Etablierung einer Methode zur mikrobiellen Transglutaminase (mTG)-vermittelten PEGylierung von Proteine auf der Ebene der Lysinreste (Lys).
Ergebnisse: Carboxybenzyl-Glutaminyl-Glycinyl-Methoxypolyethylenglykol (CBZ-QG-mPEG) wurde durch Einführung von Carboxybenzyl-Glutaminyl-Glycin (CBZ-QG) in mPEG-Amin hergestellt. Die Analyse mittels Fourier-Transformations-Infrarotspektroskopie und SDS-PAGE zeigte, dass CBZ-QG-mPEG erfolgreich synthetisiert wurde und von mTG als Acyldonor zur Modifizierung des therapeutischen Proteins Cytochrom C (Cyt C) erkannt werden kann. Unter optimierten Bedingungen (Cyt c 0,5 mg/ml, CBZ-QG-mPEG 11,25 mg/ml, mTG 0,5 mg/ml, 37 °C, 2 h) erreichte die PEGylierungsausbeute schließlich 76,5 %.
Schlussfolgerungen: Dies ist die erste Studie zur PEGylierung von Proteinen auf der Ebene von Lys-Resten, die durch mTG katalysiert wird. Die neuartige Methode könnte zur Immobilisierung aktiver Proteine und zur Modifikation therapeutischer Proteine eingesetzt werden.
Schlüsselwörter: Lysinrest; Mikrobielle Transglutaminase; PEGylierung; Therapeutisches Protein; Transglutaminase.
Abkürzung: mPEG-NH2
Name: Methoxypoly(ethylenglycol)amin
Abkürzung: mPEG-SPA
Name: Methoxypoly(ethylenglycol)succinimidylpropionat
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